pbs缓冲液配制（dpbs和pbs的区别）Pbs缓冲液的制备(dpbs和pbs的区别)

实验离不开各种解决方案，实验台上琳琅满目的瓶瓶罐罐基本都是每个实验者自己配置的。

正确准备这些不同名称的溶液是你实验成功的基础。一旦某个解决方案出了问题，不仅会导致整个实验的失败，而且有时候找出原因也会让人摸不着头脑。

今天就来说说缓冲液的相关知识，了解一下实验室常用缓冲液的混合方法。

实验室中的各种缓冲溶液

首先，让我们知道什么是缓冲溶液。缓冲溶液通常是由“弱酸及其共轭碱”或“弱碱及其共轭酸”的缓冲对组成的溶液，当加入一定量的其他物质时，可以减缓pH值的变化。以生物实验中最常用的缓冲液之一PBS为例。它是由Na2HPO4和KH2PO4组成的缓冲对，在PH5.8-8.0的pH范围内有很强的缓冲能力。

缓冲原理

假设缓冲溶液中含有弱酸HA及其共轭碱a，溶液中的质子反应如下:

水合氢离子的浓度取决于弱酸与其共轭碱的浓度比。当加入少量强碱时，酸被中和，导致溶液中氢氧离子的积累很少，从而增加了C (a)的浓度，降低了C(HA)的浓度。

可以看出，虽然加入了强碱，但溶液中的氢氧离子变化不大，而C (a) C (ha)的浓度相对较高，相对变化较小，两者的比例几乎没有变化，所以根据公式，水合氢离子的浓度变化不大。加入弱酸也是如此。因为C (a) C (ha)大浓度基数的微小变化不会改变比值，所以维持了体系中氢离子和氢氧根离子的浓度平衡。

缓冲溶液的选择和计算

为了确保缓冲溶液具有足够强的缓冲能力，在制备缓冲溶液时，有必要进行以下操作:

为了使共轭酸碱对的浓度比接近1，应根据所需pH范围选择合适的缓冲液对，使其中弱酸的PKa等于或接近所需pH。

例如生物培养液中需要PH=7.0的缓冲液，已知H2PO4-的PKA2为7.21，因此H2PO4—HPO42- 2是合适的缓冲液对。如果配制PH=9.0的缓冲溶液，可以选择NH3 H2O-NH4Cl缓冲对(pKa(NH4+)=9.25)。可见弱酸性的Ka是选择缓冲液的主要依据，表中列出了几种常用的缓冲液。

缓冲溶液的作用

缓冲溶液的作用是在有限的范围内调节溶液的pH值，使被测溶液的酸度符合分析方法规定的范围。例如，苯酚可以在碱性介质和铁氰化钾存在下与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料。为了防止芳香胺的干扰，最适pH值为10.2。因此，需要向待测溶液中加入氨-金钱氯化物缓冲溶液，以调节和控制待测溶液的酸碱度为10.0-0.2。

在实际工作中，一些分析师对缓冲溶液的机理了解不多。当配制和使用的缓冲液与规定值不匹配时，为了使缓冲液满足要求，他们用盐酸或氢氧化钠等强酸强碱进行调节，认为这样做可以使缓冲液尽快达到所需的酸碱度。然而，结果恰恰相反。虽然这种溶液的酸碱度调节正确，但其缓冲系统被破坏，功能丧失。缓冲溶液

使用注意事项

使用缓冲液时的注意事项:很多缓冲液含有挥发性成分，如氨-氯化铵中的氨基甲酸、醋酸钠中的醋酸等。目前，许多实验室都引入了定量加液装置来添加试剂，其特点是简单、准确、误差恒定，尤其是在制作批量样品时。很多同志也喜欢用它来加缓冲。但需要注意的是，缓冲液不能长时间存放在定量加液装置中，因为容器没有密封，氨容易挥发(醋酸-醋酸钠缓冲液中的醋酸也是如此)，从而导致溶液失效。

当涉及到缓冲时，它必须被扩展。这是亨德森-哈苏方程。

如前所述，

同时取方程的对数并简化，得到:

或者

这就是亨德森-哈苏方程。

注:式中酸及其共轭碱的浓度为平衡时的浓度。除了酸度太强的情况外，由于离子效应相同，一般可以用这个公式计算。

普通成分

通常用作缓冲溶液的酸由弱酸及其共轭酸盐组成的溶液具有缓冲作用。常见的缓冲系统有:

1.弱酸及其盐(如HAc – NaAc)

2.弱碱及其盐(NH3·H2O-NH4Cl)

3.多元弱酸的酸式盐及其相应的二级盐(如NaH2PO4 – Na2HPO4)由水溶液组成。

但生化实验室常用的缓冲体系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、乙酸、巴比妥酸、Tris(三甲基氨基甲烷)等体系。在生化实验或研究工作中要慎重选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某些离子。缓冲剂如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷都可能产生不需要的化学反应。

硼酸盐:硼酸盐与许多化合物形成复盐，如蔗糖。

柠檬酸盐:柠檬酸根离子很容易与钙结合，所以不能在钙离子存在的情况下使用。

磷酸盐:在一些实验中，它是酶的抑制剂，甚至是代谢产物，重金属很容易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。此外，当酸碱度高于7.5时，其缓冲能力很小。

三甲基氨基甲烷:能与重金属作用，但在某些系统中也有抑制作用。它的主要缺点是温度效应。这一点经常被忽视。室温下Tris缓冲液的pH值为7.8，4℃时为8.4，37℃时为7.4。因此，当在4℃制备的缓冲液在37℃测量时，其氢离子浓度增加了10倍。pH7.5以下，其缓冲能力极其不理想。

基于

将Trizma碱和Trizma HCl(适马的Tris比率法)与1l 50mm Tris缓冲液混合。

1L 1M磷酸钠缓冲液(pH6.0-7.2)配比表(25℃)

1 100毫米磷酸钠缓冲液(pH5.8-8.0)比例表(25°C)

50毫米甘氨酸-盐酸缓冲液

制备200毫米药液(a)和200毫米盐酸(b)；50毫升(甲)+十毫升(乙)，稀释至200毫升。

酸碱度范围表如下

50毫米甘氨酸-氢氧化钠缓冲液

配制200毫米药剂溶液(甲)和200毫米氢氧化钠(乙)；50毫升(甲)+十毫升(乙)，稀释至200毫升。

酸碱度范围表如下

50毫米醋酸缓冲液

制备200毫米醋酸溶液(甲)和200毫米醋酸钠溶液(乙)；x毫升(甲)+Y毫升(乙)，稀释至100毫升。

酸碱度范围如下

50毫米柠檬酸盐缓冲液

配制100毫米柠檬酸溶液(甲)和100毫米柠檬酸钠溶液(乙)；x毫升(甲)+Y毫升(乙)，稀释至100毫升。

下表显示了酸碱度范围

50毫米碳酸缓冲液

制备200毫米Na2CO3 (A)和200毫米碳酸氢钠(b)；x毫升(甲)+Y毫升(乙)，稀释至200毫升。

酸碱度范围表如下

公共广播公司

调节酸碱度至所需值，用蒸锅或滤膜消毒。

当然，这八种缓冲肯定不是唯一的。局长在这里只是简单列举这8种。最后附上各种缓冲液的pH范围，看看你需要的缓冲液有没有在里面~ ~